金针菇菌种是经人工培育的供进一步繁殖用的纯菌丝，相当于农艺和园艺作物的无性繁殖体，如石榴、葡萄的枝条等。优质菌种遗传性状优异，生命力旺盛、适应性广、抗杂力强、产量高。它的制备技术包括金针菇纯种的分离及母种、原种、栽培种的制作技术。

母种由金针菇子实体、孢子或菌丝经提纯培育而成，一般盛装在玻璃试管中。用金针菇直接分离而成的母种叫一级母种，转管扩大1次而成的叫二级母种，由二级母种转管扩大而成的叫三级母种，依次类推。生产上一般常用三级或四级母种，一般1支母种可转扩5~6支二级母管，多次扩转会影响金针菇产量与质量。母种菌丝纤细，分解养分能力弱，且菌种菌丝量少，不易直接用于栽培，必须进行扩大培养。

原种由母种转扩而成，容器一般用标准菌种瓶葡萄糖瓶、罐头瓶或其他瓶类，培养料有棉籽壳、麦粒、木屑、玉米粒等。1支母种可转接4~6瓶原种。栽培种由原种转扩而成，容器多为菌种瓶或塑料袋，原料多为棉籽壳或木屑，1瓶原种可转接20~25瓶（袋）栽培种。

金针菇菌种容易老化，在生产上一定要把握好制种时间，一般母种应在原种制作前10~12天进行生产，原种应在栽培种制作前30天制备，栽培种应在生产前30~35天进行制作。

制种要选好地址，最好坐北朝南、冬暖夏凉、地势高燥、环境清洁、空气新鲜交通方便，有水源、电源，平坦空旷，附近没有禽舍、粮食和饲料库，还要远离酿酒、造醋、酱园、制曲等食品工厂。房间设计要既能关闭，又能通风，光线充足，墙壁刷白灰，涂防水涂料。各作业区和专用房室布局合理，便于流水作业和无菌操作。

菌种制作前必须进行空间及物体表面的消毒处理，常用消毒方法有紫外线辐射灭菌；化学药物甲醛、硫磺、消毒盒等熏蒸灭菌；酒精、来苏儿、高锰酸钾等喷洒或擦拭消毒及干热消毒法消毒。北京国内供卵紫外线辐射灭菌就是灭菌室或接种箱用黑布遮光，每20立方米空间用1支30瓦紫外线灯辐射2小时。

按每立方米10毫升甲醛溶液与5克高锰酸钾混合于玻璃器皿或其他容器内，关闭门窗，任甲醛挥发，闷1夜或更长时间，即可达到消毒效果。熏蒸后室内可喷洒25%~28%的氨水或放置部分碳酸氢铵，以去除甲醛的刺激气味。也可按每立方米15~20克硫磺或4~6克消毒盒点燃熏蒸。化学药剂消毒法主要有：①皮肤消毒：用75%酒精、1%~3%来苏儿、15%漂白粉及高锰酸钾1：1000倍的水溶液任何一种均可。②接种室、接种箱喷雾消毒用3%~5%来苏儿或0.5%~1.0%石炭酸或0.25%新洁而灭溶液。③器械浸泡消毒：常用75%酒精溶液、1%~2%升汞溶液、3%~5%来苏儿液等。④培养料消毒：常用0.02%多菌灵、石灰、克霉灵等拌入培养料中防止杂菌感染。

干热消毒法常用的有烘箱和火焰消毒法，其中火焰灭菌最为常用，但它仅限于对试管口、瓶口及接种工具进行消毒。较大的玻璃器皿和金属工具，通常放在烘箱内进行消毒处理，消毒温度要求达到160℃并维持2小时。

金针菇母种培养基以马铃薯、葡萄糖配方(即PDA培养基）最常用，其制作方法是：选择优质马铃薯，去皮并挖去芽眼，切成薄片，称取200克，加入1000毫升烧杯中，补水到1000毫升，煮沸30分钟，用4层纱布过滤，取其汁液。

若汁液不足1000毫升，应加水补足，然后加入葡萄糖20克、琼脂20克，边搅拌，一边加温，全部融化后再补水至1000毫升，用玻璃棒拌J，加热保持热度。

将配制好的PDA培养基趁热（60℃左右）利用漏斗分装入试管，每支试管装管长得1/4，培养液不可黏附管口内壁，如有黏附物必须措试干净，取适量棉花做成较紧实的棉塞，塞入试管2厘米左右，紧贴试管，外留1厘米，松紧度以用手指提起棉塞不掉为宜，而后将试管放入铁丝筐内准备灭菌。

灭菌时要在装有培养基的试管上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜，包扎好以防棉塞受潮，再将试管培养基放入高压锅。灭菌时要先排尽锅内的冷气，当高压锅内气压达到0.005兆帕时，打开排气阀，待压力表降到“0”时，关闭排气阀，继续加温。

气压达到0.014兆帕时，保持恒压半小时左右，停火降压至“0”时进行排气，待培养基温度降到60℃左右时，取出摆成斜面，斜面长度为试管长度的1/3或1/2，冷却后就成为试管斜面培养基，也称母种培养基

灭菌后要进行效果检查，随机抽取几支斜面试管培养基放在23℃恒温箱中空白培养5~7天后，检查斜面上有无细菌或霉菌菌斑，若发现有杂菌，说明灭菌不彻底，不能继续使用，须重新配制灭菌。

下期分享母种的分离及栽培种的制备

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